麥胚凝集素（WGA）是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結(jié)合的凝集素。它是目前研究多、應用廣泛的一類凝集素。WGA與糖綴合物結(jié)合，其衍生物和綴合物被廣泛用于標記細胞膜和纖維化瘢痕組織，用于熒光成像和分析。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的iFluor 488小麥胚芽凝集素（WGA）。
實驗方案
樣品分析方案
溶液配制
儲備溶液配制
iFluor 488 小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物儲備液 (200X)
將 500 μL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的儲備溶液。 注意：重新配制的綴合物溶液可在 2-8 °C 下短期儲存，或在 -20 °C 下長期儲存。
工作溶液配制
iFluor 488-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物工作溶液 (1X)
將 5 μL 200X WGA 儲備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。
注意：不同細胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同。 活細胞的推薦起始濃度為 5-10 μg/mL。
操作步驟
1.活細胞染色
1.1 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
1.2 添加 100 μL iFluor 488-WGA 工作溶液。
1.3 將細胞與 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分鐘。
1.4 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
1.5 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
2.固定細胞染色
2.1 在PBS中使用4％的甲醛固定細胞。
注意：對于固定細胞膜染色，建議在沒有透化步驟的情況下進行染色。固定后透化步驟會導致細胞內(nèi)區(qū)室染色，如高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng) (ER) 結(jié)構(gòu)染色。
2.2 添加 100 μL iFluor 488-WGA 工作溶液。
2.3 在室溫下用 WGA 工作溶液孵育細胞 10-30 分鐘。
2.4 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
2.5 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
實驗圖示
圖 1. 使用 iFluor 488-小麥胚芽凝集素 (WGA) 綴合物以 5 μg/mL的濃度在活細胞（Hela細胞） 染色 30 分鐘，然后用 Hoechst 33342（Cat# 17535）染色。后使用帶FITC和DAPI濾波片組的熒光顯微鏡成像。